The perbezaan utama antara GFP dan EGFP adalah bahawa GFP (singkatan Protein Fluoresen Hijau) adalah protein yang menunjukkan pendarfluor hijau terang ketika terkena cahaya biru sedangkan EGFP (singkatan Protein Fluoresen Hijau Bertingkat) menunjukkan pendarfluor yang lebih kuat daripada GFP. Selanjutnya, satu perbezaan penting lain antara GFP dan EGFP adalah bahawa GFP adalah protein jenis liar yang diasingkan dari ubur-ubur, Aequorea victoria. Tetapi, EGFP adalah varian rekayasa dari jenis liar asli.

GFP dan EGFP adalah dua jenis protein yang berfungsi sebagai kromofor dalaman. Mereka tidak memerlukan enzim aksesori / substrat, kofaktor atau produk gen untuk menunjukkan warnanya. Oleh itu, kedua-duanya digunakan sebagai pelapor ekspresi gen dalam biologi molekul.

Kromofor, EGFP, GFP, Pendarfluor Hijau, Protein Jenis Liar

Apa itu GFP

GFP (protein pendarfluor hijau) adalah protein yang bersinar hijau di bawah cahaya biru atau UV. Secara semula jadi ia berlaku di ubur-ubur, Aequorea Victoria. GFP terdiri daripada 238 asid amino. Saiz GFP ialah 26.9 kDa. GFP adalah alat yang kuat dalam biologi molekul kerana pendarfluor intrinsiknya tanpa molekul aksesori. Pendarfluor adalah kerana penyusunan semula kovalen asid amino protein yang bersebelahan. Selepas lipatan protein, atom rantai utama, Ser65, Tyr66 dan Gly67 membentuk kromofor p -hydroxybenzylideneimidazolinone planar yang sangat konjugasi di hadapan O₂. Kajian struktur kristal mendedahkan bahawa pembungkusan kromofor dalam teras struktur b-tong molekul melindunginya daripada pendinginan melalui oksigen paramagnetik, dipol air atau isomerisasi cis-trans. Sebagai tambahan, interaksi kovalof yang tidak kovalen dengan molekul yang berdekatan meningkatkan sifat spektrumnya.

Gambar 1: Perwakilan Riben GFP dan Fluorophore

GFP dapat diperkenalkan ke dalam organisma semasa pengubahsuaian transgenik. Ia juga dapat dikekalkan secara turun-temurun. Kelemahan utama GFP jenis liar adalah penurunan keberkesanan protein dalam pencitraan sel yang disebabkan oleh kecekapan rendah melipat pada suhu fisiologi seperti 37 ° C, menjatuhkan isyarat pendarfluor. Juga, kadar pematangan GFP di dalam sel inang perlahan sementara cenderung agregat. Dua puncak pengujaan dapat diperhatikan kerana adanya dua bentuk kromofor yang berbeza. Walau bagaimanapun, teknik protein telah menyelesaikan sebahagian besar masalah dengan memperkenalkan varian bentuk GFP liar.

Apa itu EGFP

EGFP (protein pendarfluor hijau yang dipertingkatkan) adalah varian GFP jenis liar dengan pelepasan intensiti lebih tinggi berkenaan dengan GFP. Ini adalah salah satu varian GFP pertama dan paling penting. Kedua mutasi, F64L dan S65T, menghasilkan EGFP dengan kecekapan lipatan yang lebih besar pada 37 ° C. Menariknya, EGFP mempunyai puncak pengujaan tunggal pada ~ 490 nm kerana penekanan puncak 395 nm oleh S65T kerana ia memodulasi keadaan ion Glu222 yang berdekatan. Sebaliknya, F64L meningkatkan kecekapan lipatan pada suhu 37 ° C. Yang penting, urutan kodon EGFP dioptimumkan untuk ekspresi dalam sel mamalia.

Gambar 2: Ungkapan EGFP

Persamaan Antara GFP dan EGFP

Perbezaan Antara GFP dan EGFP

Definisi

GFP: Protein liar yang menunjukkan pendarfluor hijau di bawah cahaya biru atau UV dan secara semula jadi terdapat pada ubur-ubur, Aequorea Victoria

EGFP: Varian GFP jenis liar dengan pelepasan intensiti lebih tinggi berkenaan dengan GFP

Bermaksud

GFP: Protein pendarfluor hijau

EGFP: Protein pendarfluor hijau yang dipertingkatkan

Asal

GFP: Jenis liar

EGFP: Mutan

64^ika Asid amino

GFP: Fenilalanin

EGFP: Leucine

65^ika Asid amino

GFP: Serine

EGFP: Threonin

Kecerahan Warna

GFP: Hijau terang

EGFP: Hijau lebih terang

Puncak Pengujaan

GFP: Dua puncak (395 nm dan 490 nm)

EGFP: Puncak tunggal (490 nm)

Kecekapan Lipat pada 37 ° C

GFP: Rendah

EGFP: Tinggi

Kesimpulannya

GFP adalah protein jenis liar yang menunjukkan pendarfluor hijau terang apabila terkena cahaya biru atau UV. EGFP adalah varian GFP yang menunjukkan pendarfluor intensiti lebih tinggi jika dibandingkan dengan GFP. Oleh itu, perbezaan utama antara GFP dan EGFP adalah intensiti pendarfluor hijau yang dikeluarkan oleh setiap protein.

Rujukan:

1. Arpino, James A. J., et al. "Struktur Kristal Protein Fluoresen Hijau yang Dipertingkatkan hingga 1,35 Å Resolusi Mengungkapkan Konformasi Alternatif untuk Glu222." Perubatan PLOS, Perpustakaan Sains Awam, jurnal.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Gambar Kesopanan:

1. "Gfp dan fluorophore" Oleh Raymond Keller (Raymond Keller (bicara)), di bawah naungan Crystal Protein. - Karya sendiri (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia 2. "Fgams ppat egfp puncta" Oleh Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Enzim Biosintetik Purine Transfeksi Transien Membentuk Badan Tekanan. PLOS SATU 8 (2): e56203. doi: 10.1371 / jurnal.pone.0056203 (CC BY 3.0) melalui Wikimedia Commons