Perbezaan Utama - Vektor Kloning vs Vektor Ekspresi

Vektor kloning dan vektor ekspresi adalah dua jenis vektor, yang digunakan dalam teknologi DNA rekombinan untuk membawa segmen DNA asing ke dalam sel sasaran. Kedua-dua vektor pengklonan dan ekspresi terdiri dari asal usul replikasi, laman sekatan yang unik, dan gen penanda yang dapat dipilih dalam urutan vektor mereka. Kedua-dua vektor pengklonan dan ekspresi adalah replikasi diri kerana adanya asal replikasi. Vektor kloning boleh berupa plasmid, kosmid atau bakteriofag. The perbezaan utama antara vektor pengklonan dan vektor ekspresi adalah bahawa vektor pengklonan digunakan untuk membawa segmen DNA asing ke dalam sel inang, sedangkan vektor ekspresi adalah jenis vektor pengklonan, yang mengandungi isyarat ekspresi yang sesuai dengan ekspresi gen maksimum.

Kawasan Utama Dilindungi

1. Apa itu Vektor Pengklonan - Definisi, Jenis, Kegunaan 2. Apa itu Vektor Ekspresi - Definisi, Jenis, Kegunaan 3. Apakah persamaan antara Vektor Kloning dan Vektor Ekspresi - Garis Besar Ciri Umum 4. Apakah perbezaan antara Vektor Kloning dan Vektor Ekspresi - Perbandingan Perbezaan Utama

Syarat-syarat Utama: Bakteriofag, Vektor Kloning, Kosmid, DNA, Teknologi DNA, Konstruksi Ekspresi, Vektor Ekspresi, Asal Replikasi, Wilayah Penggalak, RNA Rekombinan, Plasmid, Laman sekatan, Penanda yang boleh dipilih

Apa itu Vektor Pengklonan

Vektor kloning berfungsi sebagai molekul DNA pembawa. Semua vektor pengklonan mempunyai empat ciri khas:

Terdapat banyak pilihan vektor pengklonan klasik seperti plasmid, phage, dan kosmid bergantung pada tujuannya. Pemilihan vektor pengklonan bergantung pada ukuran sisipan dan aplikasi.

Plasmid

Plasmid secara semula jadi molekul DNA ekstrakromosom, untai ganda, yang mampu mereplikasi secara automatik di dalam sel bakteria. Had ukuran sisipan dalam plasmid ialah 10 kb. Plasmid digunakan sebagai vektor pengklonan dalam manipulasi subcloning dan downstream, pengklonan cDNA dan uji ekspresi. PBR322 adalah salah satu plasmid pertama yang direkayasa secara genetik untuk digunakan dalam teknologi DNA rekombinan. Plasmid pBR322 ditunjukkan dalam rajah 1.

Gambar 1: pBR322

Fasa

Phages berasal dari lambda bacteriophage di mana laman cos lambda bacteriophage membolehkannya dibungkus ke kepala phage. Replikasi DNA vektor di dalam sel inang akhirnya akan menyebabkan lisis sel. Ukuran sisipan yang boleh dimasukkan ke dalam vektor fag adalah 5-12 kb. Vektor phage digunakan dalam pengklonan DNA genom, pengklonan cDNA, dan perpustakaan ekspresi.

Kosmid

Kosmid adalah sejenis plasmid yang mengandungi tapak cos bakteriofag lambda. Tapak kosmetik lambda bakteriofag memungkinkannya dimasukkan ke dalam kepala fag. Walaupun ia adalah plasmid, replikasi kosmid di dalam sel inang mungkin tidak mencairkan sel seperti pada vektor fag. Ukuran sisipan yang dapat diklon menjadi vektor kosmid ialah 35-45 kb. Vektor vektor digunakan dalam pembinaan perpustakaan genom.

Oleh kerana gen mamalia selalunya lebih besar daripada 100 kb, urutan gen yang lengkap tidak dapat diklon dengan vektor pengklonan klasik. Masalah ini diatasi dengan meniru sifat kromosom sel inang menjadi vektor. Vektor jenis ini dipanggil vektor kromosom tiruan. BAC (vektor kromosom buatan bakteria), YAC (vektor kromosom tiruan ragi), dan MAC (vektor kromosom tiruan mamalia) adalah jenis vektor kromosom tiruan.

BAC

Vektor kromosom buatan bakteria berdasarkan plasmid faktor F Escherichia coli. Ukuran sisipan yang dapat diklon menjadi vektor BAC adalah 75-300 kb. Vektor BAC digunakan dalam analisis genom besar.

YAC

Vektor kromosom tiruan ragi didasarkan pada Saccharomyces cerevisiae centromere, telomere, dan urutan lain yang meniru secara autonomi. Ukuran sisipan yang dapat diklon menjadi vektor YAC adalah 100-1 Mb. Vektor YAC digunakan dalam analisis genom besar.

MAC

Vektor kromosom tiruan mamalia berdasarkan pada sentromer mamalia, telomere dan asal replikasi. Ukuran sisipan dalam MAC adalah 100 kb hingga 1 Mb. MAC digunakan dalam bioteknologi haiwan dan terapi gen manusia.

Apa itu Vektor Ekspresi

Vektor ekspresi, juga disebut sebagai konstruk ekspresi, adalah sejenis plasmid. Gen khas diperkenalkan ke sel inang oleh vektor ekspresi di mana ekspresi gen yang diubah difasilitasi oleh vektor ekspresi dengan penggunaan mesin transkrip dan terjemahan selular. Vektor ekspresi merangkumi urutan peraturan seperti penambah dan wilayah penggalak, yang membawa kepada ekspresi gen yang cekap. Selepas ekspresi protein tertentu seperti insulin di dalam sel inang, produk harus dimurnikan dari protein sel inang. Oleh itu, protein yang diperkenalkan sama ada ditandai dengan histidin (labelnya) atau protein lain. Untuk mendapatkan ekspresi gen yang diperkenalkan secara efisien di dalam sel inang, isyarat ekspresi berikut harus dimasukkan ke dalam vektor ekspresi.

Gambar 2: pGEX-3X

Persamaan Antara Vektor Kloning dan Vektor Ekspresi

Perbezaan Antara Vektor Kloning dan Vektor Ekspresi

Definisi

Vektor Pengklonan: Vektor kloning adalah sekeping kecil DNA yang dapat dikekalkan secara stabil di dalam sel inang. Ia digunakan untuk memasukkan gen ke dalam sel sambil memperoleh banyak salinan sisipan.

Vektor Ekspresi: Vektor ekspresi adalah plasmid yang digunakan untuk memperkenalkan gen tertentu ke dalam sel sasaran dan mekanisme sel komando untuk menghasilkan produk gen yang relevan.

Peranan

Vektor Pengklonan: Vektor kloning digunakan untuk memperoleh banyak salinan segmen DNA yang dimasukkan.

Vektor Ekspresi: Vektor ekspresi digunakan untuk mendapatkan produk gen segmen DNA yang dimasukkan, sama ada protein atau RNA.

Jenis-Jenis

Vektor Pengklonan: Vektor kloning boleh berupa plasmid, kosmid, phage, BAC, YAC, atau MAC.

Vektor Ekspresi: Vektor ekspresi adalah vektor plasmid.

Ciri-ciri Vektor

Vektor Pengklonan: Vektor kloning terdiri dari asal replikasi, laman sekatan unik, dan penanda yang boleh dipilih.

Vektor Ekspresi: Vektor ekspresi merangkumi penambah, wilayah promosi, kodon penamatan, urutan permulaan transkripsi, dan urutan permulaan terjemahan dalam vektor sebagai tambahan kepada ciri khas vektor pengklonan.

Kesimpulannya

Vektor kloning dan vektor ekspresi mudah digunakan dalam teknologi DNA rekombinan untuk memperkenalkan segmen DNA asing ke dalam sel sasaran. Kedua-dua vektor pengklonan dan vektor ekspresi mampu meniru sendiri di dalam sel inang. Vektor kloning biasanya digunakan untuk memperkenalkan gen asing ke dalam sel sasaran sambil memperoleh banyak salinan gen yang diperkenalkan. Vektor ekspresi digunakan untuk mendapatkan produk gen, baik protein atau RNA gen yang diperkenalkan di dalam sel inang. Sebilangan besar protein rekombinan seperti insulin dihasilkan dengan penggunaan vektor ekspresi. Perbezaan utama antara vektor pengklonan dan vektor ekspresi adalah penerapan setiap vektor dalam teknologi DNA rekombinan.

Rujukan:

1. "Vektor Pengklonan." Pengklonan dan Analisis Molekul Gen. N.p., n.d. Web. Terdapat di sini. 18 Jun 2017. 2. "Vektor Shuttle dan Vektor Ekspresi." Tanpa had. Tanpa had, 26 Mei 2016. Web. Terdapat di sini. 18 Jun 2017.

Gambar Kesopanan:

1. "PBR322" Oleh Ayacop (+ Yikrazuul) - Karya sendiri (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons2. "Vektor pengklonan PGEX-3X" Oleh Magnus Manske - Dibuat oleh Magnus Manske (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons